一、产品概述DDX6DEAD-box解旋酶6是DEAD-box RNA解旋酶家族的成员在RNA代谢的多个环节中发挥核心作用包括mRNA降解、翻译调控及核糖核蛋白复合物组装。由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的本产品A300-461A为针对人DDX6蛋白C端区域的兔多克隆抗体经抗原亲和纯化可同时识别人和小鼠来源的DDX6适用于免疫组织化学IHC、免疫沉淀IP和蛋白质印迹WB。抗体识别表位位于DDX6第425–483位氨基酸接近C末端具有极高的检测灵敏度WB推荐稀释度高达1:25,000–1:50,000。二、关键规格参数 | 详细信息靶标 | DDX6反应性 | 小鼠、人应用 | IHC, IP, WB宿主 | 兔克隆性 | 多克隆形式 | 完整IgG免疫原 | 第433位至C末端区域同型 | IgG偶联物 | 未偶联纯度 | 抗原亲和纯化抗原种属 | 人浓度 | 1000 ug/ml保存条件 | 2 – 8 °C有效期 | 收货后1年缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液pH 7-8含0.09%叠氮化钠三、分子生物学背景DDX6Gene ID 1656Uniprot P26196是DEAD-box解旋酶家族的特征成员其名称来源于高度保守的DEADAsp-Glu-Ala-Asp氨基酸基序。该家族蛋白的主要功能是作为ATP依赖的RNA解旋酶利用ATP水解释放的能量重塑RNA二级结构或RNA-蛋白质相互作用。DDX6参与RNA代谢的全过程包括pre-mRNA剪接协助剪接体复合物的组装与重排RNA合成与降解在mRNA衰变途径如无义介导的降解中发挥作用RNA输出与翻译调控mRNA从细胞核向细胞质的转运及翻译起始效率核糖核蛋白RNP复合物组装参与P小体processing bodies的形成介导mRNA的暂时储存或降解研究表明DDX6通过翻译水平调控基因表达正向调节细胞生长。其异常表达与多种肿瘤发生相关故又称癌基因RCK。DDX6的分子量约为54 kDa别名包括ATP依赖性RNA解旋酶p54、DEAD box蛋白6、HLR2、P54等。四、储存与稳定性抗体以1000 ug/ml浓度提供于Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液pH 7-8中含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。收到后请于2–8°C条件下保存严禁冷冻。反复冻融会导致蛋白变性和聚集降低抗体效价。在正确储存条件下自收货之日起可稳定保存1年。注意叠氮化钠对HRP活性有抑制作用。若后续使用HRP偶联二抗进行化学发光检测务必确保洗涤充分如需彻底去除叠氮化钠可使用脱盐柱或透析。应用与推荐工作条件蛋白质印迹WB推荐稀释范围1:25,000 – 1:50,000超高灵敏度封闭与抗体稀释液5%脱脂牛奶-TBST一抗孵育过夜孵育推荐4°C标准二抗山羊抗兔IgG重链轻链抗体货号A120-101P免疫沉淀后WB的特殊要求当检测免疫沉淀产物中的DDX6时为避免免疫沉淀抗体重链约55 kDa与DDX6约54 kDa分子量重叠造成的信号干扰推荐使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体进行检测并在封闭缓冲液中加入5%正常猪血清货号S100-020。轻链特异性二抗仅识别约25 kDa的轻链可完全排除重链区域的假阳性或遮盖效应。免疫沉淀IP推荐用量6 ug抗体 / mg细胞裂解液标准IP流程1. 使用非变性裂解缓冲液如含150 mM NaCl、1% NP-40、50 mM Tris-HCl pH 7.4添加蛋白酶抑制剂制备细胞裂解物。2. 取1 mg总蛋白裂解液加入6 ul本抗体1000 ug/ml即1 ug/ul。3. 4°C旋转孵育过夜12–16小时。4. 加入20–30 ul Protein A琼脂糖珠继续4°C孵育2–4小时。5. 用裂解缓冲液洗涤琼脂糖珠3–5次。6. 加入SDS上样缓冲液煮沸变性进行WB检测。免疫组织化学IHC推荐稀释范围1:1000 – 1:5000抗原修复推荐使用Tris-EDTA缓冲液pH 9.0进行热诱导抗原修复样本类型福尔马林固定石蜡包埋FFPE组织切片IHC操作提示脱蜡和水化后将切片置于Tris-EDTA缓冲液pH 9.0中使用高压锅或微波炉进行热修复95–100°C15–20分钟。自然冷却至室温后进行封闭如5%正常山羊血清或BSA。一抗在推荐稀释范围内进行滴定建议从1:2000开始摸索最佳条件。本抗体凭借其超高的检测灵敏度WB高达1:50,000、跨物种反应性人/小鼠以及多应用兼容性IHC/IP/WB是研究RNA代谢、翻译调控、P小体功能以及DDX6相关肿瘤发生机制的理想工具。