摘要纳米抗体VHH因具有分子量小、稳定性高、组织穿透性强以及能够识别隐蔽表位等特点近年来在抗体药物研发领域受到广泛关注。传统VHH发现流程通常依赖噬菌体展示等多轮筛选技术周期较长且容易丢失稀有高亲和力克隆。本文结合真实药企案例介绍涛烜科学 Hypercell 高通量单细胞分选系统在羊驼VHH抗体快速发现中的应用流程包括羊驼PBMC处理、B细胞激活、单细胞液滴包裹、高通量功能分选、NGS测序及AbFinder生信分析等关键步骤为纳米抗体研发提供一种更高效的单细胞筛选方案。关键词单B细胞筛选、单细胞筛选、单B细胞分选、B细胞抗体发现、B细胞抗体筛选、羊驼纳米抗体、单B细胞分选、纳米抗体筛选、VHH抗体发现、抗体药物研发、涛烜Hypercell、纳米抗体快速筛选转载声明本文经授权转载自公众号「涛烜科学 Bioelectronica」未经许可禁止二次转载。上海曼博生物是涛烜科学中国官方直售商可提供基于单B细胞分选的抗体发现系统相关技术支持。Hypercell系统单日分选 一周出序列助力羊驼VHH快速发现纳米抗体VHH凭借分子量小、稳定性高、组织穿透性强以及能够识别隐蔽表位等优势近年来已经成为抗体药物研发的重要方向之一。但传统VHH发现通常依赖噬菌体展示等多轮筛选流程整体周期往往长达数周甚至数月不仅研发效率较低还容易在筛选过程中丢失部分高亲和力克隆。针对这一问题涛烜科学推出 Hypercell 高通量单细胞分选系统构建了从羊驼PBMC、B细胞激活、单细胞分选、建库测序到序列验证的端到端工作流可实现单日完成高通量功能分选并在一周内获得特异性VHH序列。该方案目前已成功应用于上海某药企膜蛋白靶点纳米抗体开发项目并通过真实数据验证了其在速度、阳性率及筛选效率方面的优势。项目背景与实验需求本次项目来自上海某药企实验目标为开展羊驼纳米抗体VHH快速发现。实验使用的抗原类型为23.3KD膜蛋白胞外结构域样本来源于羊驼PBMC经B细胞富集与激活后进入后续筛选流程。下游采用NGS Bulk测序结合AbFinder生信分析及抗体验证。传统方案在此类项目中通常存在多轮淘选、周期长、效率低、容易丢失稀有高亲和力克隆以及扩增偏好性等问题同时人工操作较多也会影响实验重复性。相比之下Hypercell方案更加突出“功能优先、单细胞水平、天然性保留以及快速交付”等特点。19天快速完成从样本到阳性序列本项目整体周期仅19天即完成了从抗原制备、血清质控、细胞制备、B细胞激活、单细胞分选到后续测序衔接的完整流程。在Day1阶段研究人员完成了生物素化抗原偶联DRB微球并通过PODs血清信号质控确认客户样本具有明显阳性信号可满足后续上机筛选条件。在Day2至Day7阶段从羊驼PBMC中高效富集B细胞并完成体外激活。激活后共获得Ag记忆B细胞204M纯度达到45.4%。Day6收集的细胞活率及状态良好满足单细胞液滴包裹要求。Day8阶段完成Hypercell单细胞液滴包裹与信号质控单细胞液滴孵育约1.5小时质控参数显示λ0.15细胞数450k同时背景信号较弱、阳性信号清晰满足高质量上机筛选要求。Day9阶段则开展高通量单细胞分选与破乳回收实验使用 Hypercell SM66 系统硬件、芯片与耗材运行稳定。最终获得Hit总数2257个Cluster size为8signal contrast达到80。随后按2257个目标细胞完成Trizol保存并交付客户开展后续建库测序。后续约10天内完成建库测序与序列验证共获得抗体序列1020条。初步验证50条后获得27条阳性序列整体序列多样性较高并具备较好的亲和力表现可直接进入后续表达与功能验证阶段。羊驼单B抗体发现流程图核心实验数据高检出率与高阳性率本次实验中Hypercell系统共获得分选总Hit数2557个拼接有效序列1631条初步验证序列29条。其中单阳性序列数25条86%双阳性序列数28条96%全流程周期样本到阳性序列约29天实验结果表明该系统不仅能够实现高通量筛选同时也具备较高阳性率与较好的序列多样性表现。上海某药企真实实验数据数据来源上海某药企羊驼PBMC激活与上机实验真实报告Hypercell系统在羊驼VHH发现中的优势相比传统纳米抗体筛选方案Hypercell系统在多个方面具有明显优势。首先在workflow效率方面可实现单日完成单细胞分选包括细胞包裹、孵育、检测、分选与回收等流程全程2周左右即可完成从PBMC到阳性VHH序列的发现相比传统方法提速5-10倍。其次系统采用功能优先策略可在液滴内实时检测抗体分泌与抗原结合双信号从而保留体内亲和力成熟的天然VHH避免传统文库扩增带来的偏好性问题。同时系统具备较高信噪比可减少弱阳性克隆丢失。在通量与灵敏度方面Hypercell单次可处理数十万细胞通过微流控液滴实现真正单克隆包裹从而降低交叉干扰提高稀有克隆检出率。此外该系统还能够兼容10x Genomics等单细胞测序平台并结合AbFinder生信工具完成序列聚类、亲和力预测以及候选排序实现从细胞到序列再到验证的一站式闭环流程。值得注意的是Hypercell方案还针对羊驼PBMC与驼科VHH抗体进行了专项优化可兼容新鲜或冻存PBMC样本对纳米抗体开发场景具有较好的适配性。案例总结Hypercell高通量单细胞分选系统能够适配羊驼VHH纳米抗体开发需求实现高通量、高灵敏、高速度的一体化单细胞筛选方案。本案例中可实现单日完成高通量单细胞分选从PBMC到阳性序列仅需约2周获得2257个Hit与1631条抗体序列阳性验证率达到80%以上兼容多种抗原、样本类型及下游测序方案对于布局纳米抗体药物、双特异性抗体、ADC、CAR以及创新诊断试剂研发的药企与科研机构而言Hypercell系统可帮助缩短研发周期、降低筛选成本并提高抗体发现成功率。更多关于 Hypercell 高通量单细胞分选系统、羊驼VHH抗体发现及单细胞抗体筛选相关技术内容可参考https://www.mine-bio.com/Bioelectronica/?utm_sourcecsdnutm_mediumreferralutm_campaignhypercell_article关于技术来源本文基于涛烜科学 Hypercell 公开资料整理。上海曼博生物可提供Hypercell单B细胞分选系统羊驼VHH抗体发现方案纳米抗体筛选单细胞抗体发现系统高通量单细胞筛选技术支持等相关产品与技术支持服务。